Overview - area di ricerca biomedica
La ricerca biomedica di Avantea si svolge in tre settori: modelli animali, cellule staminali e test tossicologici, tutti settori che si basano sull’applicazione di tecnologie della riproduzione avanzate.
In ambito biomedico Avantea ha preso parte ad un grande progetto di ricerca Europeo, Xenome, per la derivazione di suini con caratteristiche genetiche tali da renderli più immunocompatibili con l’uomo. L’obiettivo è quello di generare dei suini, tramite clonazione, che possano essere donatori di tessuti per l’uomo. Altri progetti di ricerca in corso riguardano la generazione di suini per la chirurgia sperimentale, cioè suini portatori di geni marcatori che consentano di identificare i loro tessuti dopo trapianto e suini modello di alcune patologie degenerative umane.
Nell’area delle cellule staminali Avantea ha partecipato al progetto di ricerca europeo (Plurysis, FP7) e svolge ricerca di base sulle cellule embrionali staminali dell’embrione bovino come modello comparativo rispetto al modello delle cellule staminali murine.
Nell’ambito dell’utilizzo delle tecnologie della riproduzione per scopi biomedici Avantea è partner del progetto Reprotect, nel quale ha sviluppato alcuni test tossicologici basati su gameti e embrioni animali, e dei progetti Esnats e Scr&tox nei quali lo sviluppo dei test è basato su cellule staminali di varia origine. Si tratta di un’area di ricerca fortemente emergente a livello internazionale e che risponde all’esigenza di mettere a punto dei test di laboratorio alternativi all’uso dei piccoli roditori, normalmente utilizzati per i test tossicologici convenzionali, vale a dire test che non richiedano sacrifici animali.
Avantea coordina progetti nazionali e internazionali in ambito di ricerca biomedica. Per ulteriori informazioni
Modelli animali
Il modello animale al centro della ricerca Avantea è il suino, specie che per le sue caratteristiche fisiologiche è la più vicina all'uomo dopo i primati.
In generale i modelli animali sono importanti per la ricerca biomedica perchè possono offrire un'approssimazione delle patologie umane e possono contribuire alla comprensione dei meccanismi eziopatologici e allo sviluppo di trattamenti o di strategie di prevenzione.
I modelli sviluppati da Avantea sono suini generati combinando l'ingegneria genetica con la tecnica della clonazione somatica. La procedura consiste nella derivazione di linee cellulari somatiche (in genere fibroblasti) con caratteristiche genetiche in parte modificate attraverso l'introduzione o rimozione di uno o più geni di interesse. Successivamente le cellule portatrici delle caratteristiche desiderate sono utilizzate nella procedura di clonazione per ottenere embrioni clonati che vengono trapiantati in scrofe riceventi. In questo modo si possono ottenere animali portatori di modificazioni genetiche analoghe a quelle di malattie genetiche dell'uomo creando quindi un modello animale di una particolare malattia.
Allo stesso modo possono essere ottenuti animali con caratteristiche genetiche tali da renderli potenziali donatori di cellule e tessuti per lo xenotrapianto o per l'industria biotecnologica.
Avantea partecipa ad importanti progetti di ricerca a livello nazionale ed europeo (Translink, Xenoislet), collaborando con autorevoli istituzioni scientifiche e università, nel campo dello xenotrapianto e in particolare nell'utilizzo del suino come modello animale, in campo biomedico e in quello biotecnologico.
Pubblicazioni
Vabres B, Le Bas-Bernardet S, Riochet D, Chérel Y, Minault D, Hervouet J, Ducournau Y, Moreau A, Daguin V, Coulon F, Pallier A, Brouard S, Robson SC, Nottle MB, Cowan PJ, Venturi E, Mermillod P, Brachet P, Galli C, Lagutina I, Duchi R, Bach JM, Blancho G, Soulillou JP, Vanhove B. hCTLA4-Ig transgene expression in keratocytes modulates rejection of corneal xenografts in a pig to non-human primate anterior lamellar keratoplasty model. Xenotransplantation. 2014 Jul 8. doi: 10.1111/xen.12107. [Epub ahead of print]
Chieppa MN, Perota A, Corona C, Grindatto A, Lagutina I, Vallino Costassa E, Lazzari G, Colleoni S, Duchi R, Lucchini F, Caramelli M, Bendotti C, Galli C, Casalone C. Modeling Amyotrophic Lateral Sclerosis in hSOD1 Transgenic Swine. Neurodegener Dis. 2014;13(4):246-54. doi: 10.1159/000353472. Epub 2013 Oct 23.
Busby SA, Crossan C, Godwin J, Petersen B, Galli C, Cozzi E,Takeuchi Y, Scobie L. Suggestions for the diagnosis and elimination of hepatitis E virus in pigs used for xenotransplantation. Xenotransplantation. 2013 May 7. doi: 10.1111/xen.12038
Naso F, Gandaglia A, Bottio T, Tarzia V, Nottle MB, d'Apice AJ, Cowan PJ, Cozzi E, Galli C, Lagutina I, Lazzari G, Iop L, Spina M, Gerosa G. First quantification of alpha-Gal epitope in current glutaraldehyde-fixed heart valve bioprostheses. Xenotransplantation. 2013 Jul-Aug;20(4):252-61. doi: 10.1111/xen.12044. Epub 2013 Jul 19.
Schubert T, Poilvache H, Galli C, Gianello P, Dufrane D. Galactosyl-knock-out engineered pig as a xenogenic donor source of adipose MSCs for bone regeneration. Biomaterials. 2013;34(13):3279-89.
Spiezia L, Boldrin M, Radu C, Bulato C, Bertini D, Bon M, Campello E, Vadori M, Galli C, Gavasso S, Nottle MB, Cowan PJ, Cozzi E, Simioni P Thromboelastographic evaluation of coagulative profiles in pig-to-monkey kidney xenotransplantation. Xenotransplantation. 2013;20(2):89-99
Galli C, Lagutina I, Perota A, Colleoni S, Duchi R, Lucchini F, Lazzari G. Somatic cell nuclear transfer and transgenesis in large animals: current and future insights. Reprod Domest Anim. 2012 Jun;47 Suppl 3:2-11. doi: 10.1111/j.1439-0531.2012.02045.x.
Le Bas-Bernardet S, Tillou X, Poirier N, Dilek N, Chatelais M, Devallière J, Charreau B, Minault D, Hervouet J, Renaudin K, Crossan C, Scobie L, Cowan PJ, d'Apice AJ, Galli C, Cozzi E, Soulillou JP, Vanhove B, Blancho G. Xenotransplantation of Galactosyl-Transferase Knockout, CD55, CD59, CD39, and Fucosyl-Transferase Transgenic Pig Kidneys Into Baboons. Transplant Proc. 2011 Nov;43(9):3426-30.
Chatelais M, Devallière J, Galli C, Charreau B. Gene transfer of the adaptor Lnk (SH2B3) prevents porcine endothelial cell activation and apoptosis: implication for xenograft's cytoprotection. Xenotransplantation. 2011 Mar;18(2):108-20.
Fahrenkrug SC, Blake A, Carlson DF, Doran T, Van Eenennaam A, Faber D, Galli C, Gao Q, Hackett PB, Li N, Maga EA, Muir WM, Murray JD, Shi D, Stotish R, Sullivan E, Taylor JF, Walton M, Wheeler M, Whitelaw B and Glenn BP "Precision genetics for complex objectives in animal agriculture" J Anim Sci 2010.88:2530-2539. doi: 10.2527/jas.2010-2847 originally published online Mar 12, 2010;
Galli C, Perota A, Brunetti D, Lagutina I, Lazzari G, Lucchini F. "Genetic engineering including superseding microinjection: new ways to make GM pigs". Xenotransplantation 2010; 17: 397–410. 2010 John Wiley & Sons A/S.
Sachs DH, Galli C Genetic manipulation in pigs Current Opinion in Organ Transplantation 2009, 14:148–153.
Brunetti D, Perota A, Lagutina I, Colleoni S, Duchi R, Calabrese F, Seveso M, Cozzi E, Lazzari G, Lucchini F, Galli C. Transgene Expression of Green Fluorescent Protein and Germ Line Transmission in Cloned Pigs Derived from In Vitro Transfected Adult Fibroblasts. Cloning Stem Cells 2008.
Lagutina, I, Lazzari, G. Galli, C. Birth of cloned pigs from zona-free nuclear transfer embryos developed in vitro to blastocyst before transfer. Cloning and Stem Cells Dec 2006, Vol. 8, No. 4: 283-293.
Cellule staminali
Le cellule staminali embrionali hanno la capacità di dare origine a tutti i tipi cellulari che costituiscono un individuo adulto; per questo motivo sono cellule che rivestono un grande interesse per la ricerca biomedica e sono attualmente utilizzate in varie aree di ricerca. Un primo utilizzo è quello per lo sviluppo di test tossicologici per farmaci e sostanze chimiche potenzialmente dannose per lo sviluppo embrionale. Un'altra importante area di ricerca comprende lo studio del differenziamento verso i diversi tessuti, allo scopo di comprenderne i meccanismi molecolari e di sviluppare dei protocolli per ottenere cellule idonee alla riparazione dei tessuti tramite trapianto (terapia cellulare).Avantea ha svolto e tuttora svolge attività di ricerca nel settore delle cellule embrionali staminali nell'ambito di progetti di ricerca europei (Esnats, Scr&Tox e Plurisys), riguardanti lo sviluppo di test tossicologici e lo studio dei meccanismi che governano la pluripotenza delle staminali e guidano il loro differenziamento.
Pubblicazioni
Rossi B, Merlo B, Colleoni S, Iacono E, Tazzari PL, Ricci F, Lazzari G, Galli C. Isolation and in Vitro Characterization of Bovine Amniotic Fluid Derived Stem Cells at Different Trimesters of Pregnancy. Stem Cell Rev. 2014 Jun 7. [Epub ahead of print]
Czernik M, Fidanza A, Sardi M, Galli C, Brunetti D, Malatesta D, Della Salda L, Matsukawa K, Ptak G, Loi P. Differentiation potential and GFP labeling of sheep bone marrow derived mesenchymal stem cells. J Cell Biochem. 2013 Jan;114(1):134-43.
Lazzari G, Colleoni S, Galli C. Derivation of neural precursors from bovine preimplantation embryos. Methods Mol Biol. 2013;1074:199-207. doi: 10.1007/978-1-62703-628-3_15.
Colleoni S, Galli C, Giannelli SG, Armentero MT, Blandini F, Broccoli V, Lazzari G. Long-term culture and differentiation of CNS precursors derived from anterior human neural rosettes following exposure to ventralizing factors. Exp Cell Res. 2010 Apr.
Colleoni S, Bottani E, Tessaro I, Mari G, Merlo B, Romagnoli N, Spadari A, Galli C, Lazzari G. Isolation, growth and differentiation of equine mesenchymal stem cells: effect of donor, source, amount of tissue and supplementation with basic fibroblast growth factor. Vet Res Commun. 2009 Dec;33(8):811-21.
Fulka J, Jr., Fulka H, St John J, Galli C, Lazzari G, Lagutina I, Fulka J, Loi P. Cybrid human embryos - warranting opportunities to augment embryonic stem cell research. Trends Biotechnol 2008 Sep;26(9):469-74.
Santoni de Sio FR, Gritti A, Cascio P, Neri M, Sampaolesi M, Galli C, Luban J, Naldini L. Lentiviral Vector Gene Transfer is Limited by the Proteasome at Post-Entry Steps in Various Types of Stem Cells. Stem Cells 2008 Aug;26(8):2142-52.
Lombardo A, Beausejour CM, Genovese P, Colleoni S, Lee Y-L,Kim KA, Ando D, Urnov F, Galli C, Gregory PD, Holmes MC, Naldini L. Gene editing and site-specific gene additino in human stem cells using designed zinc finger nucleases and integrase detective lentiviral vector delivery. Nat Biotechnol. 2007 Nov;25(11):1298-306. Epub 2007 Oct 28.
Lazzari, G., Colleoni, S., Giannelli, S. G., Brunetti, D., Colombo, E., Lagutina, I., Galli, C., and Broccoli, V. Direct derivation of neural rosettes from cloned bovine blastocysts: a model of early neurulation events and neural crest specification in vitro. Stem Cells. 2006 Nov;24(11):2514-21. Epub 2006 Aug 24.
Colleoni S, Donofrio G, Lagutina I, Duchi R, Galli C, Lazzari G. Establishment, differentiation, electroporation, viral transduction, and nuclear transfer of bovine and porcine mesenchymal stem cells. Cloning Stem Cells. 2005;7(3):154-66.
Donofrio G, Colleoni S, Galli C, Lazzari G, Cavirani S, Flammini CF. Susceptibility of bovine mesenchymal stem cells to bovine herpesvirus 4. J Virol Methods. 2005 Aug;127(2):168-70.
Galli, C., Lazzari, G., Flechon, J-E & Moor, R.M. (1994). Embryonic stem cells in farm animals. Zygote 2: 385-389.
Test di tossicità
Lo sviluppo di test di tossicità in vitro rappresenta un'area di ricerca in forte espansione in tutti i paesi industrializzati perchè risponde all'esigenza, da un lato, di ridurre l'utilizzo degli animali da laboratorio per test tossicologici, e dall'altro di fornire all'industria metodiche efficaci per testare potenziali effetti tossici di sostanze chimiche della più varia natura. Per questo motivo l'Unione Europea sta finanziando numerosi progetti di ricerca integrati allo scopo di favorire lo sviluppo dei test tossicologici in vitro.
Avantea è stata ed è partner di progetti europei:
ReProTect (2004-2009) nel cui ambito ha sviluppato due test in vitro in grado di rilevare effetti tossici su gameti bovini durante la fase di maturazione e di fecondazione dell'ovocita. Allo stesso modo gli embrioni animali e le cellule embrionali staminali rappresentano un modello biologico validissimo per gli studi in vitro sulla tossicità embrionale. Questa linea di ricerca promette di fornire all'industria nuove e sensibili tecniche per gli studi tossicologici nella sfera riproduttiva.
ESNATS (Embryonic Stem cell-based Novel Alternative Testing Strategies, 2008-2013) aveva come obiettivo quello di sviluppare nuovi approcci per testare le sostanze chimiche basati sulle cellule embrionali staminali. Lo scopo era quello di accelerare lo sviluppo di farmaci, attraverso uno screening iniziale che utilizzasse tecnologie in vitro ad alta efficienza e diminuisse sostanzialmente l’utilizzo degli animali richiesti per i test di tossicità convenzionali.
Scr&Tox, insieme a 13 soggetti internazionali (industriali e accademici), avente gli obiettivi di sviluppare per l’industria cosmetica europea alternative ai test tossicologici, aumentare l’affidabilità delle sostanze chimiche e cosmetiche, ridurre l’utilizzo dei test sugli animali. Lo sviluppo di test tossicologici alternativi è considerato di fondamentale importanza per l’intera industria cosmetica europea, per perseguire l’obiettivo di tutelare la salute umana, migliorando la sicurezza e l’affidabilità dei prodotti. Insieme ad altri 5 progetti, Scr&TOX, è parte di un’unica iniziativa europea finanziata da Commissione Europea e COLIPA, l’Associazione Europea delle Industrie Cosmetiche. Lo scopo di Scr&TOX è generare nuove tecniche e metodologie di analisi di tossicità per testare cosmetici e farmaci, prima che possano essere commercializzati.
Contattaci per ricevere ulteriori informazioni
Pubblicazioni
- Reuven EM, Leviatan Ben-Arye S, Yu H, Duchi R, Perota A, Conchon S, et al. Biomimetic Glyconanoparticle Vaccine for Cancer Immunotherapy. ACS nano. 2019.
- Perota A, Lagutina I, Duchi R, Zanfrini E, Lazzari G, Judor JP, et al. Generation of cattle knockout for galactose-alpha1,3-galactose and N-glycolylneuraminic acid antigens. Xenotransplantation. 2019:e12524.
- Crociara P, Chieppa MN, Vallino Costassa E, Berrone E, Gallo M, Lo Faro M, et al. Motor neuron degeneration, severe myopathy and TDP-43 increase in a transgenic pig model of SOD1-linked familiar ALS. Neurobiology of disease. 2019;124:263-75.
- Trapani I, Perota A, Tiberi P, Colecchi L, Lagutina I, Duchi R, et al.Genome Editing to Generate a Pig Model of Stargardt Disease Type 1.Molecular Therapy. 2018;26:403-4.
- Scobie L, Galli C, Gianello P, Cozzi E, Schuurman HJ. Cellular xenotransplantation of animal cells into people: benefits and risk. Revue scientifique et technique (International Office of Epizootics). 2018;37:113-22.
- Linda S, Claire C, I. MN, Cesare G, Andrea P, Pierre G. Viral pathogens: What are they and do they matter? Xenotransplantation. 2018;25:e12412.
- Quadalti C, Brunetti D, Lagutina I, Duchi R, Perota A, Lazzari G, et al. SURF1 knockout cloned pigs: Early onset of a severe lethal phenotype. Biochim Biophys Acta. 2018;1864:2131-42.<
- Barone A, Benktander J, Whiddon C, Jin C, Galli C, Teneberg S, et al. Glycosphingolipids of porcine, bovine, and equine pericardia as potential immune targets in bioprosthetic heart valve grafts. Xenotransplantation. 2018;25:e12406.
- Salama A, Mosser M, Leveque X, Perota A, Judor JP, Danna C, et al. Neu5Gc and alpha1-3 GAL Xenoantigen Knockout Does Not Affect Glycemia Homeostasis and Insulin Secretion in Pigs. Diabetes. 2017;66:987-93.
- Naso F, Stefanelli U, Buratto E, Lazzari G, Perota A, Galli C, et al. Alpha-Gal Inactivated Heart Valve Bioprostheses Exhibit an Anti-Calcification Propensity Similar to Knockout Tissues().Tissue Eng Part A. 2017;23:1181-95.
- Mourad NI, Perota A, Xhema D, Galli C, Gianello P. Transgenic Expression of Glucagon-Like Peptide-1 (GLP-1) and Activated Muscarinic Receptor (M3R) Significantly Improves Pig Islet Secretory Function. Cell transplantation. 2017;26:901-11.<
- Duisit J, Orlando G, Debluts D, Maistriaux L, Xhema D, de Bisthoven YJ, et al. Decellularization of the Porcine Ear Generates a Biocompatible, Nonimmunogenic Extracellular Matrix Platform for Face Subunit Bioengineering. Annals of surgery. 2017.
- Barandalla M, Shi H, Xiao H, Colleoni S, Galli C, Lio P, et al. Global gene expression profiling and senescence biomarker analysis of hESC exposed to H2O2 induced non-cytotoxic oxidative stress. Stem Cell Res Ther. 2017;8:160.
- Barandalla M, Haucke E, Fischer B, Navarrete Santos A, Colleoni S, Galli C, et al. Comparative Analysis of AGE and RAGE Levels in Human Somatic and Embryonic Stem Cells under H2O2-Induced Noncytotoxic Oxidative Stress Conditions. Oxid Med Cell Longev. 2017;2017:4240136.
- Rubio A, Luoni M, Giannelli SG, Radice I, Iannielli A, Cancellieri C, et al. Rapid and efficient CRISPR/Cas9 gene inactivation in human neurons during human pluripotent stem cell differentiation and direct reprogramming. Sci Rep. 2016;6:37540.
- Reynard O, Jacquot F, Evanno G, Mai HL, Salama A, Martinet B, et al. Anti-EBOV GP IgGs Lacking alpha1-3-Galactose and Neu5Gc Prolong Survival and Decrease Blood Viral Load in EBOV-Infected Guinea Pigs. PLoS One. 2016;11:e0156775.
- Quadalti C, Galli C, Lazzari G. Development of an in vitro test battery for the screening of the receptor-mediated mechanism and the spindle-poison mode of action of estrogenic compounds. Environ Toxicol Pharmacol. 2016;48:245-52.
- Perota A, Lagutina I, Quadalti C, Lazzari G, Cozzi E, Galli C. The Applications of Genome Editing in Xenotransplantation.Journal of Genetics and Genomics. 2016;43:233-7.
- Butler JR, Martens GR, Estrada JL, Reyes LM, Ladowski JM, Galli C, et al. Silencing porcine genes significantly reduces human-anti-pig cytotoxicity profiles: an alternative to direct complement regulation. Transgenic Res. 2016.
- Buist M, Komatsu E, Lopez P, L. G, Bodnar E, Salama A, et al. Features of N-Glycosylation of Immunoglobulins from Knockout Pig Models J Anal Bioanal Tech. 2016;7.
- Tessaro I, Modina SC, Crotti G, Franciosi F, Colleoni S, Lodde V, et al. Transferability and inter-laboratory variability assessment of the in vitro bovine oocyte fertilization test. Reprod Toxicol. 2015;51C:106-13.
- Paulis M, Castelli A, Susani L, Lizier M, Lagutina I, Focarelli ML, et al. Chromosome transplantation as a novel approach for correcting complex genomic disorders. Oncotarget. 2015;6:35218-30.
- Le Bas-Bernardet S, Tillou X, Branchereau J, Dilek N, Poirier N, Châtelais M, et al. Bortezomib, C1-Inhibitor and Plasma Exchange Do Not Prolong the Survival of Multi-Transgenic GalT-KO Pig Kidney Xenografts in Baboons. American Journal of Transplantation. 2015;15:358-70.
- Colleoni S, Galli C, Gaspar JA, Meganathan K, Jagtap S, Hescheler J, Zagoura D, Bremer S, Sachinidis A, Lazzari G. A comparative transcriptomic study on the effects of valproic acid on two different hESCs lines in a neural teratogenicity test system. Toxicol Lett. 2014 Sep 2;231(1):38-44. doi: 10.1016/j.toxlet.2014.08.023. [Epub ahead of print]
- Chieppa MN, Perota A, Corona C, Grindatto A, Lagutina I, Vallino Costassa E, Lazzari G, Colleoni S, Duchi R, Lucchini F, Caramelli M, Bendotti C, Galli C, Casalone C. Modeling Amyotrophic Lateral Sclerosis in hSOD1 Transgenic Swine.Neurodegener Dis. 2014;13(4):246-54. doi: 10.1159/000353472. Epub 2013 Oct 23.
- Colleoni S, Galli C, Gaspar JA, Meganathan K, Jagtap S, Hescheler J, Zagoura D, Bremer S, Sachinidis A, Lazzari G. A comparative transcriptomic study on the effects of valproic acid on two different hESCs lines in a neural teratogenicity test system. Toxicol Lett. 2014 Sep 2;231(1):38-44. doi: 10.1016/j.toxlet.2014.08.023. [Epub ahead of print]
- Colleoni S, Galli C, Gaspar JA, Meganathan K, Jagtap S, Hescheler J, Sachinidis A, Lazzari G. Characterisation of a neural teratogenicity assay based on human ESCs differentiation following exposure to valproic acid. Curr Med Chem. 2012 Dec 1;19(35):6065-71.
- Colleoni S, Galli C, Gaspar JA, Meganathan K, Jagtap S, Hescheler J, Sachinidis A, Lazzari G. Development of a neural teratogenicity test based on human embryonic stem cells: response to retinoic Acid exposure. Toxicol Sci. 2011 Dec;124(2):370-7.
- Lorenzetti S, Altieri I, Arabi S, Balduzzi D, Bechi N, Cordelli E, Galli C, Ietta F, Modina SC, Narciso L, Pacchierotti F, Villani P, Galli A, Lazzari G, Luciano AM, Paulesu L, Spanò M, Mantovani A. Innovative non-animal testing strategies for reproductive toxicology: the contribution of Italian partners within the EU project ReProTect. Ann Ist Super Sanita. 2011;47(4):429-44. Review.
- Luciano AM, Franciosi F, Lodde V, Corbani D, Lazzari G, Crotti G, Galli C, Pellizzer C, Bremer S, Weimer M, Modina SC.Transferability and inter-laboratory variability assessment of the in vitro bovine oocyte maturation (IVM) test within ReProTect.Reprod Toxicol. 2010 Aug;30(1):81-8
- Schenk B, Weimer M, Bremer S, van der Burg B, Cortvrindt R, Freyberger A, Lazzari G, Pellizzer C, Piersma A, Schäfer WR, Seiler A, Witters H, Schwarz M. The ReProTect Feasibility Study, a novel comprehensive in vitro approach to detect reproductive toxicants. Reprod Toxicol. 2010 Aug;30(1):200-18
- Lazzari G, Tessaro I, Crotti G, Galli C, Hoffmann S, Bremer S, Pellizzer C. Development of an in vitro test battery for assessing chemical effects on bovine germ cells under the ReProTect umbrella. Toxicol Appl Pharmacol. 2008; 233:360-70.
- Bremer S, Balduzzi D, Cortvrindt R, Daston G, Eletti B, Galli A, Huhtaniemi I, Laws S, Lazzari G, Liminga U, Smitz J, Spano M, Themmen A, Tilloy A, Waalkens-Behrends I. The effects of chemicals on mammalian fertility. The report and recommendations of ECVAM Workshop 53--the first strategic workshop of the EU ReProTect Project. Altern Lab Anim. 2005 Aug;33(4):391-416. Full text.